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猪(Porcine)多杀性巴氏杆菌抗体(PM-Ab) ELISA检测试剂盒

时间:2022-01-27 13:30:18      
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检测原理

试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素(PMT)微孔中,依次加入标本、HRP标记的检测抗原,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),与CUT OFF值相比较,从而判定标本中多杀性巴氏杆菌抗体(PM-Ab)的存在与否。

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试剂盒组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12孔×8条

12孔×4条

阴性对照

0.5mL

0.5mL

阳性对照

0.5mL

0.5mL

检测抗原-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

样本稀释液

6mL

3mL

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2张

2张

说明书

1份

1份

自封袋

1个

1个


操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔,阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL;

3.  待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;

4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。


结果判断

 1.  试验有效性:阳性对照孔OD值平均值≥1.00;

                阴性对照孔OD值平均值≤0.15。

2.  临界值(Cut off)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3.  阴性判断:样品OD值<临界值(Cut off),样品为阴性

4.  阳性判断:样品OD值>临界值(Cut off),样品为阳性


试剂盒性能

1.  准确性:阳性对照孔OD值平均值≥1.00;阴性对照孔OD值平均值≤0.15,说明试验结果有效。

2.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

4.  贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

5.  有效期:6个月


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